Descriure amb detall els passos i mètodes de selecció de sondes fluorescents per a microscòpia confocal
En experiments amb microscopis confocals, alguns indicadors experimentals es poden detectar mitjançant l'autofluorescència de la mostra mateixa o substàncies exògenes, però la majoria de les substàncies a provar no tenen fluorescència mesurable i s'han d'etiquetar amb sondes fluorescents. Té un senyal fluorescent mesurable. Aleshores, com triar sondes fluorescents per a la microscòpia confocal?
1. Determinar els indicadors a provar segons la finalitat de l'experiment
Un cop determinat l'índex de detecció, també es determina el rang de selecció de sondes fluorescents. Es pot veure que l'elecció de quina sonda fluorescent utilitzar en l'experiment està determinada pel propòsit de l'experiment. Per exemple, si l'objectiu de l'experiment és estudiar els canvis dels ions de calci en els cardiomiòcits quan es produeix la fibril·lació auricular, es pot determinar que la substància a provar són ions de calci en els cardiomiòcits i el rang de selecció de sondes fluorescents es limita a Sondes d'ions de calci que poden marcar cèl·lules vives. Agulla.
2. Determineu el rang de sondes fluorescents disponibles
Per a noves substàncies o indicadors experimentals, si l'objectiu de l'experiment no és explorar noves sondes fluorescents, podeu optar per aplicar sondes madures i mètodes d'etiquetatge. El tipus o la gamma de sondes fluorescents que poden etiquetar la substància que s'ha de provar es pot determinar cercant literatura autoritzada o catàlegs de productes d'empreses de reactius conegudes a casa i a l'estranger.
3. Investigar si les característiques de la sonda fluorescent compleixen els requisits per a la preparació de mostres fluorescents
Les característiques de les sondes fluorescents afecten directament l'etiquetatge de les mostres i els resultats experimentals. Per tant, abans de seleccionar sondes fluorescents i etiquetar mostres a l'experiment, cal entendre completament les seves característiques de fluorescència. Les característiques de les sondes fluorescents a investigar inclouen:
1. Característiques de reacció de sondes i mostres de llum
2. Sensibilitat i intensitat de fluorescència de sondes fluorescents
3. Propietats espectrals de mostres marcades amb sondes fluorescents
4. Estabilitat de la fluorescència
5. Interacció entre fluorescències múltiples de la mostra
