Mètodes de depuració i passos per a la microscòpia de contrast de fase
a. A partir de l'ajust del sistema d'il·luminació Kuhler, utilitzeu el mètode de camp brillant per enfocar la mostra clarament;
b. Gireu el focus a Ph1 i alineeu-lo amb la línia d'escala del tocadiscos. Seleccioneu un objectiu de contrast de fase de 10 x i substituïu-lo per la mostra transparent a observar;
c. Traieu un dels oculars, substituïu-lo per un telescopi centrador i centreu-vos en els dos anells de contrast del camp de visió (l'anell de contrast negre de la lent de l'objectiu i l'anell de contrast de transmitància de la lent del condensador);
d. Els dos anells de diferència en el camp de visió poden no coincidir necessàriament. Ajusteu els dos dispositius d'ajust al focus (ajustant les posicions esquerra i dreta dels anells de diferència amb barres d'ajust i pols de fricció per ajustar les posicions davantera i posterior), de manera que l'anell transparent es mogui cap endavant i cap enrere per coincidir amb l'anell negre ;
e. Després de l'ajust, torneu a l'ocular d'observació i premeu el filtre verd al camí òptic per observar la imatge de diferència de fase de la mostra;
f. Quan s'observa amb lents d'objectiu de 20 x i 40 x, el focus s'ha de posar a la posició Ph2, i quan s'utilitza una lent d'objectiu de 100 x, el focus s'ha de posar a la posició Ph3.
Àmbit d'aplicació: Adequat per observar mostres transparents, sense tacar o sense tacar, com diverses cèl·lules, teixits vius, rodanxes de teixit sense tacar o sense tacar, organismes aquàtics, etc.
El principi bàsic del microscopi de contrast de fase
Quan la llum travessa una mostra relativament transparent, no hi ha cap canvi significatiu en la longitud d'ona (color) i l'amplitud (brillantor) de la llum. Per tant, quan s'observen exemplars sense tacar (com cèl·lules vives) sota un microscopi òptic normal, sovint són difícils de distingir la seva morfologia i estructura interna. Tanmateix, a causa de les diferències en l'índex de refracció i el gruix de les diferents parts de la cèl·lula, hi haurà diferències en el camí òptic de la llum directa i difractada en passar per aquesta mostra. A mesura que el camí òptic augmenta o disminueix, la fase de les ones lluminoses accelerades o retardades canviarà (donant com a resultat una diferència de fase). La diferència de fase de la llum no es pot sentir a ull nu, però el microscopi de diferència de fase pot utilitzar el seu dispositiu especial: una obertura circular i una placa de fase, i utilitzar el fenomen d'interferència de la llum per transformar la diferència de fase de la llum en una diferència d'amplitud. (diferència clara i fosca) que pot ser detectada per l'ull humà. Això fa que l'objecte originalment transparent mostri diferències evidents de llum i foscor, millora el contrast i ens permet observar clarament cèl·lules vives i certes estructures fines dins de les cèl·lules que no es poden veure o veure clarament amb microscopis òptics normals i microscopis de camp fosc.
El principi d'imatge d'un microscopi de contrast de fase: la font òptica només pot passar a través d'un anell transparent d'una obertura circular, que després s'enfoca en un feix de llum. Quan aquest feix de llum travessa l'objecte que s'està provant, experimenta diferents graus de desviació (difracció) a causa dels diferents camins òptics de cada part. A causa del fet que la imatge formada per l'anell transparent coincideix amb la superfície conjugada de la placa de fase i el pla focal darrere de la lent de l'objectiu. Per tant, la llum directa que no s'ha desviat passa per la superfície conjugada, mentre que la llum difractada que s'ha desviat passa per la superfície compensadora. A causa de les diferents propietats de la superfície conjugada i de la superfície de compensació a la placa de fases, generaran, respectivament, una certa diferència de fase i reducció d'intensitat de la llum que passa per aquestes dues parts. Els dos conjunts de llum convergiran a través de la lent posterior i viatjaran pel mateix camí òptic, provocant interferències entre la llum directa i la difractada, canviant la diferència de fase en diferència d'amplitud. D'aquesta manera, durant la microscòpia de contrast de fase, la diferència de fase que no es pot distingir per l'ull humà es converteix en una diferència d'amplitud (diferència de brillantor) que l'ull humà pot distingir a través de la llum d'un cos transparent incolor.
