Principis bàsics dels microscopis làser confocals
El nucli de la microscòpia làser confocal es troba en la tecnologia "confocal". Aquesta tecnologia utilitza una font de llum puntual (generalment un làser) i un sistema òptic especial, de manera que només s'il·lumina i s'imagina la mostra del punt focal durant el procés d'imatge, mentre que les àrees fora del punt focal s'ignoren. Aquest mètode de detecció i il·luminació selectiva millora significativament la resolució i el contrast de la imatge.
1. Font de llum
Els microscopis confocals utilitzen làsers com a fonts de llum perquè els làsers tenen una alta monocromaticitat, coherència i direccionalitat. Aquestes característiques permeten que els làsers proporcionin una il·luminació estable i un control precís de l'enfocament del feix.
2. Sistema d'il·luminació
El sistema d'il·luminació inclou un làser i un dispositiu d'escaneig. El raig làser es mou ràpidament a través d'un dispositiu d'escaneig (normalment un galvanòmetre) per aconseguir l'exploració punt per punt de la mostra. Aquest mètode d'escaneig permet que el raig làser formi una sèrie de punts focals a la mostra, aconseguint així imatges capa per capa de la mostra.
3. Abertura confocal
Hi ha una obertura confocal entre la lent de l'objectiu del microscopi i la mostra. La funció d'aquesta obertura és limitar la profunditat de la imatge, i el detector només pot rebre la llum que passa per aquesta obertura. D'aquesta manera, només la llum del punt focal pot entrar al detector, mentre que la llum fora del punt focal queda bloquejada.
4. Lent objectiu
La lent objectiu és un component clau en la microscòpia confocal, responsable d'enfocar el làser sobre la mostra i recollir la llum reflectida o emesa de tornada per la mostra. Les lents objectius d'alta qualitat poden proporcionar imatges d'alta-resolució.
5. Detector
El detector és l'encarregat de rebre la llum que passa per l'obertura confocal i la converteix en un senyal elèctric. A continuació, aquests senyals elèctrics es processen per generar imatges.
6. Tractament d'imatges
Les dades en brut generades per la microscòpia confocal són una sèrie d'imatges bi-dimensionals que han de ser processades per programari informàtic per reconstruir imatges en tres-dimensions. Aquest procés inclou la superposició d'imatges, la millora i la reconstrucció 3D.
