Aplicació i ús dels principis del microscopi de fluorescència
Principis i característiques estructurals dels microscopis de fluorescència: els microscopis de fluorescència utilitzen una font de llum puntual amb una alta eficiència lluminosa per emetre llum d'una determinada longitud d'ona (com ara llum ultraviolada de 3650 polzades o llum blau morat de 4200 polzades) a través d'un sistema de filtre de color com a llum d'excitació per excitar la fluorescència a la mostra. Després que la substància emeti fluorescència de diversos colors, s'observa mitjançant l'ampliació de la lent de l'objectiu i l'ocular. D'aquesta manera, sota un fons fort contrastant, encara que la fluorescència sigui molt feble, és fàcil d'identificar i té una alta sensibilitat. S'utilitza principalment per a l'estudi de l'estructura i la funció cel·lular, així com per a la composició química. L'estructura bàsica d'un microscopi de fluorescència es compon d'un microscopi òptic ordinari més alguns accessoris (com ara font de llum de fluorescència, filtre d'excitació, divisor de feix de dos colors, filtre de bloqueig, etc.). Font de llum fluorescent: generalment utilitza una làmpada de mercuri d'ultra alta pressió (50 a 200 W), que pot emetre llum de diverses longituds d'ona, però cada substància fluorescent té una longitud d'ona d'excitació que produeix la fluorescència més forta, de manera que un filtre d'excitació (generalment hi ha filtres d'excitació ultraviolat, morat, blau i verd), que només permeten que la llum d'excitació d'una determinada longitud d'ona passi i il·lumini l'exemplar, alhora que absorbeix tota la resta de llum. Després que cada substància sigui irradiada per llum d'excitació, emet fluorescència visible amb una longitud d'ona més gran que la longitud d'ona d'irradiació en molt poc temps. La fluorescència és específica i és generalment més feble que la llum d'excitació. Per observar una fluorescència específica, cal un filtre de bloqueig (o supressió) darrere de la lent de l'objectiu. Té dues funcions: una és absorbir i bloquejar l'entrada de llum d'excitació a l'ocular per evitar pertorbar la fluorescència i danyar els ulls; l'altra és seleccionar i deixar passar una fluorescència específica per mostrar un color de fluorescència específic. Els dos filtres s'han de seleccionar i utilitzar junts.
