Avantatges de les millores en microscopis multifotònics d'escaneig làser
El microscopi multifotòn d'escaneig làser és una millora significativa de la microscòpia òptica, que es manifesta principalment en la capacitat d'observar estructures profundes de cèl·lules vives, cèl·lules fixes i teixits, i obtenir estructures plànoles Z-de múltiples capes clares i nítides, és a dir, rodanxes òptiques, que es poden utilitzar per construir estructures sòlides d'exemplars tridimensionals. El microscopi confocal utilitza una font de llum làser, que s'amplia per omplir tot el pla focal de la lent de l'objectiu, i després convergeix en punts molt petits del pla focal de la mostra a través del sistema de lents de la lent de l'objectiu. Segons l'obertura numèrica de la lent de l'objectiu, el diàmetre del punt d'il·luminació brillant és d'uns 0,25-0,8 μm i la profunditat és d'uns 0,5-1,5 μm. La mida del punt confocal ve determinada pel disseny del microscopi, la longitud d'ona del làser, les característiques de l'objectiu, la configuració de l'estat de la unitat d'escaneig i les propietats de la mostra. El rang d'il·luminació i la profunditat d'un microscopi de camp són grans, mentre que la il·luminació d'un microscopi confocal se centra en un punt focal del pla focal. L'avantatge bàsic de la microscòpia confocal és que pot realitzar una secció òptica fina en mostres fluorescents gruixudes (fins a 50 μ m o més), amb un gruix d'aproximadament 0,5 a 1,5 μ m. La sèrie d'imatges de rodanxes òptiques es pot obtenir movent la mostra cap amunt i cap avall mitjançant el motor pas a pas de l'eix Z-del microscopi. La recopilació d'informació d'imatge es controla dins del pla * *, sense interferències dels senyals emesos des d'altres posicions de la mostra. Després d'eliminar la influència de la fluorescència de fons i augmentar la relació senyal-soroll, el contrast i la resolució de les imatges confocals es milloren significativament en comparació amb les imatges de fluorescència d'il·luminació de camp tradicionals. En molts exemplars, components estructurals complexos s'entrellacen per formar sistemes complexos, però un cop es poden recollir prou seccions òptiques, podem utilitzar programari per reconstruir-les en tres dimensions. Aquest mètode experimental s'ha utilitzat àmpliament en la investigació biològica per dilucidar les complexes relacions estructurals i funcionals entre cèl·lules o teixits.
