Avantatges i desavantatges de la microscòpia d'exploració làser multifotònica (MLSM)
La microscòpia d'exploració làser multifotònica és un mètode experimental basat en la tecnologia de microscòpia d'escaneig làser, que proporciona millors capacitats de secció òptica per a l'observació tridimensional. El mètode d'excitació de fluorescència multifotònica utilitza llum vermella de longitud d'ona llarga o llum infraroja propera per recollir imatges de fluorescència d'alta resolució d'exemplars, la qual cosa causa un dany mínim als exemplars vius. Per tant, és adequat per a imatges de cèl·lules vives, especialment teixits vius gruixuts com ara rodanxes de cervell, embrions, etc. Estudis d'imatge d'òrgans sencers o fins i tot de cossos sencers.
Els avantatges són els següents:
1. Utilitzeu llum vermella o llum infraroja per excitar, i la dispersió de la llum és petita (la dispersió de partícules petites és inversament proporcional a la quarta potència de la longitud d'ona).
2. No es necessita cap forat, i es poden recollir més fotons dispersos de la secció transversal de la imatge.
3. El forat no pot distingir els fotons dispersos emesos des de l'àrea desenfocada o de l'àrea d'enfocament, i la relació senyal-soroll de la imatge multifotònica en capes profundes és bona.
4. La llum ultraviolada o visible utilitzada per a l'excitació d'un sol fotó és fàcilment absorbida i atenuada per la mostra abans que el feix arribi al pla focal, i és difícil excitar capes profundes.
5. Pel que fa a l'observació al microscopi biològic, la primera consideració és no danyar l'estat actiu del propi organisme i mantenir el flux d'aigua, la concentració d'ions, l'oxigen i els nutrients. En el cas de l'observació de la llum, tant la calor com l'energia fotogràfica s'han de mantenir dins de la quantitat d'irradiació i l'energia lluminosa perquè les cèl·lules no es facin malbé.
6. La microscòpia multifotònica també té molts avantatges. Per exemple, en termes de resolució tridimensional, penetració de profunditat, eficiència de dispersió, llum de fons, relació senyal-soroll, control, etc., hi ha característiques transcendents que els microscopis làser anteriors no tenien o no podien coincidir.
La microscòpia d'exploració làser confocal multifocal s'ha estès a diversos camps d'investigació i aplicació. Pot realitzar observacions tridimensionals no destructives de mostres en el seu estat natural i pot millorar la resolució i la relació senyal-soroll del sistema. Ús de materials d'excitació multifotònica Els canvis en les propietats també poden realitzar l'emmagatzematge de dades d'alçada tridimensional i el micromecanitzat tridimensional en qualsevol direcció, que té un alt valor d'aplicació. Es creu que amb el desenvolupament de la maquinària, els materials, la tecnologia làser, etc. relacionats amb la microscòpia confocal multifocal, la microscòpia d'exploració làser confocal fotònica rebrà un major desenvolupament i una aplicació més àmplia.
Els desavantatges són els següents:
1. Només pot imatge fluorescència.
2. Si la mostra conté cromòfors que poden absorbir la llum d'excitació, com ara pigments, la mostra es pot danyar per la calor.
3. La resolució es redueix lleugerament. Encara que es pot millorar utilitzant forats confocals al mateix temps, hi haurà pèrdua de senyal.
4. Limitat pels làsers ultraràpids cars, el cost dels microscopis d'exploració multifotòn és relativament elevat.
